رنگ آمیزی ساده باکتری ها (simple staining):
رنگ آميزي ساده يك تكنيك ساده، سريع و غير اختصاصي است که معمولا” برای تشخيص شکل، اندازه و ترتيب قرار گرفتن باکتری ها کنار هم، بکار می رود در اين نوع رنگ‌آميزي همه سلول‌ها به يك شكل رنگ مي‌گيرند. در رنگ آمیزی ساده ترجیحا از رنگهای بازی (کروموژن با بار مثبت ) استفاده می شود زیرا اسیدهای نوکلئیک و ترکیبات خاص دیواره سلولی باکتری ها دارای بار منفی بوده و با کروموژنهای کاتیونیک پیوند برقرار می کنند. متداول ترین نوع رنگهایی که در این نوع رنگ آمیزی استفاده می شود عبارتند از: متيلن بلو، كريستال ويوله، سافرانين و فوشين که بسته به نوع رنگ‌آميزي استفاده شده رنگ باكتري متفاوت خواهد بود.
– در رنگ آمیزی متيلن بلو باکتری ها به رنگ آبی دیده می شوند. در رنگ آمیزی كريستال ويوله به رنگ بنفش و در رنگ آمیزی سافرانين و فوشين به رنگ قرمز دیده می شوند.
نكته: در مواردي مانند رنگ‌آميزي مايع نخاع و يا ترشحات ادراري تناسلي كه تشخيص يك باكتري گرم منفي در يك زمينه قرمز مشكل است، از رنگ‌آميزي متيلن بلو استفاده مي‌شود زيرا باكتري‌ها بيشتر از ساير سلول‌ها اين رنگ را به خود مي‌گيرند و بصورت واضح‌تر ديده مي‌شوند.
رنگ آميزی ساده با متيلن بلو
هدف: تشخيص شکل، اندازه و ترتيب قرار گرفتن باکتری ها در کنار هم
مواد و وسايل مورد نياز
- لام ميکروسکوپی
- لوپ يا فيلدوپلاتين
- چراغ گازی
- تشتک رنگ آميزی
- رنگ متيلن بلو
- محيط های کشت ميکروبی از سه گونه باکتری اشريشياکلی، استافيلوکوکوس ائورئوس و باسيلوس سرئوس
- ميکروسکوپ نوری معمولی
روش کار
ابتدا از هر کدام از نمونه باکتری به روشی که در پيش گفته شد بر روی لام ميکروسکوپی گستره میکروبی تهيه کنيد.
گستره را خشک نموده و با استفاده از حرارت بروشی گفته شده است بر روی لام ثابت نمایید.
لام گسترهفیکس شده را روی تشتک رنگ آميزی قرار داده و مانند شکل روی گستره را با رنگ متيلن بلوپوشانده و پس از یک دقيقه آن را با آب شیرشستشو دهيد.
يادآوری: هنگام شستشوی لام با آب بهتر است از آب فشان ( پيست) استفاده شود. با گيره چوبی لام را در يک دست به طرف پايين نگه داشته و با دست ديگر آب را با پيست به آرامی روی لام بريزيد. با اين کار از پاشيده شدن رنگ بر روی لباس و دست ها جلوگيری می شود. لام های شسته شده را با خشک کن خشک نموده و آن را با استفاده ميکروسکوپ ابتدا با عدسی x ۱۰ وx ۴۰ میدان مورد نظر را تنظیم نموده و در آخر با عدسی x100و روغن ايمرسيون بررسی و مشاهده کنيد.
